案例应用丨使用WOLF G2 分选T细胞亚群

荧光激活细胞分选仪是解决这一挑战的非常合适的仪器，研究人员可以用多种荧光抗体标记细胞，并轻松识别细胞群体中的不同T细胞亚群。但是传统流式液滴分选仪的使用高压分选的原理，这可能导致大量的剪切应力，导致细胞存活率降低。此外，这些传统流式分选仪的非一次性流体系统还可能导致样本之间的交叉污染，或者产生污染样本的微生物。

WOLF G2细胞分选仪是一款温和的微流控细胞分选仪，配备2种激光，有3种配置：488/405nm、488/561nm和488/ 637nm；并且最多有9个荧光通道。此外，WOLF G2能够同时对2个目标细胞群进行分选，并使用N1单细胞分配器将单个细胞分配到96孔或384孔板中。最重要的是，G2分选细胞时产生的压力小于2 psi，并且使用完全可丢弃的流体系统， 能够实现高存活率，并消除交叉污染或微生物污染的问题。在此，我们使用配备488/637nm 和488/405nm 激光配置的G2同时鉴定和分选CD4+和CD8+T细胞。

分选策略为：通过BSC/FSC散点图鉴定外周血单个核细胞（PBMCs），并用CD45进一步鉴定白细胞。然后通过CD45+门确定CD3+和CD19+细胞，最后通过CD3+门分选CD4+和CD8+T细胞（下图）。

使用488/637nm配置的WOLF G2分选仪，分选出的CD4+和CD8+T细胞的平均纯度分别为93 ± 5.3%和91 ± 3.7%。外周血单个核细胞（PBMC）群体中CD4 T细胞和CD8 T细胞分别完成了3.2倍富集和5倍富集（下图左下）。

使用488/405nm配置的WOLF G2分选仪，同样分选到了高纯度的CD4+和CD8+T细胞， 平均纯度分别为94±2.5%和94±2.5%。外周血单个核细胞（PBMC）群体中CD4 T细胞富集了3.3倍，CD8 T细胞富集了8.5倍（下图右下）。

WOLF G2 488/637nm激光配置最多有7个荧光通道，WOLF G2 488/405nm激光配置最多有9个荧光通道， 同时其具有温和分选技术和可抛弃式流体系统。在此，成功完成了5种荧光标记物细胞的分选，能够从外周血单个核细胞（PBMC）群体中自识别 CD4+和CD8+T细胞。此外，还能够同时对CD4+和CD8+T 细胞进行分选，两种配置的平均纯度均超过90%。该实验展示了WOLF G2分析能力，并突出了它的潜在能力和可开发性。