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案例应用丨同腾新创MSC培养基在间充质干细胞3D培养基中应用（上）
Release date：2024-09-18
干细胞是一群具有自我复制能力和多向分化潜能的细胞，其可以参与细胞替代更新以及组织再生。根据来源的不同可以分为胚胎干细胞、诱导多能干细胞和成体干细胞。间充质干细胞（mesenchymal stem cells，简称MSC）属于多能干细胞，是属于中胚层的一类多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，在适宜条件下可分化为脂肪、骨、软骨等多种组织细胞。正因其强大的增殖能力和多向分化潜能，间充质干细胞被视为是继胚胎干细胞、造血干细胞之后的又一科研热点，是一种能够治疗多种系统疾病的“实用型干细胞”，目前已经成为比较火热的干细胞疗法的候选细胞之一。
间充质干细胞来源多样、取材方便，易于分离、培养、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性，有望成为组织工程、细胞重编程，以及细胞转分化理想的起始材料，因此间充质干细胞的高效培养是很多实验研究的基础。
同腾新创自主开发了CEL-G® Culture MSC 培养基系列，目前主要有以下两款产品。一款是CEL-G® Culture MSC Basal SFM间充质干细胞无血清基础培养基，适用于多种来源的间充质干细胞原代分离培养、以及传代扩增培养；Basal培养基支持MSC稳定传代至15代。另一款是CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM间充质干细胞外泌体生产无血清培养基，适用于间充质干细胞外泌体生产的细胞扩增阶段、以及收获阶段；ExoPro培养基支持MSC 2D、3D细胞培养收获外泌体。本期，我们主要介绍CEL-G® Culture MSC Basal SFM间充质干细胞无血清基础培养基。
图1. CEL-G® Culture MSC 培养基系列
CEL-G® Culture MSC Basal SFM间充质干细胞无血清基础培养基（货号：C04.004.001）是同腾新创专为人类间充质干细胞（MSC）,包括脐带间充质、骨髓间充质、脂肪间充质等干细胞设计的基础培养基。
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无血清，无动物源成分，批次间差异低；
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化学成分限定；
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含生长因子；
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不含酚红，含3.9g/L 葡萄糖，含 L-谷氨酰胺，含碳酸氢钠；
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稳定性好，连续传代至P15，表型稳定。
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本产品使用注射用水配制、为过滤除菌产品；
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储存条件：2-8℃，避光；
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本产品供科学研究或细胞体外培养使用，严禁用于人体。
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适用细胞系：脐带间充质、骨髓间充质、脂肪间充质等干细胞；
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细胞类型：贴壁细胞；
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本产品需添加5%营养添加物（自购，或选用CEL-G® Culture MSC Basal SFM Kit，货号：C04.004.003），制成MSC无血清完全培养基，在MSC的复苏、传代和反应器扩种阶段使用。
使用CEL-G® Culture MSC Basal SFM间充质干细胞无血清基础培养基培养hUC-MSCs（人脐带间充质干细胞）的倍增时间为20~30小时左右，可实现稳定传代生长。2D贴壁培养时，在培养至第15代时，镜下观察细胞形态，显示细胞仍能维持较好的成纤维细胞样生长形态。
图2. hUC-MSCs 使用 CEL-G® Culture MSC Basal SFM 培养后各代次细胞倍增时间
图3. hUC-MSCs 使用 CEL-G® Culture MSC Basal SFM 培养后P5、P10及P15代细胞生长状态
同时，使用CEL-G® Culture MSC Basal SFM间充质干细胞无血清基础培养基培养的hUC-MSCs，能稳定维持MSC表面标记物的表达。我们通过测定细胞表面标记物证明了在P15代时hUC-MSCs表面阳性标记物表达大于98%，阴性标记物小于2%，完全符合国际细胞治疗协会/中检院的检定标准。
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图4. hUC-MSCs 使用 CEL-G® Culture MSC Basal SFM 培养后表面标记物表达情况
CEL-G® Culture MSC Basal SFM间充质干细胞无血清基础培养基能够维持MSC的无分化生长，连续稳定传代至15代的同时保持细胞的形态特征和正常的染色体核型，保证MSC的高增殖率以及分化潜能，并能极大的降低批次间差异、降低各类病毒、支原体等污染风险，为MSC的培养及干细胞制剂的研发提供了科学的保障。
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