间充质干细胞（mesenchymal stem cells，简称MSC）无血清基础培养基是同腾新创专为人类间充质干细胞（包括脐带间充质、骨髓间充质、脂肪间充质等干细胞）设计的基础培养基。间充质干细胞无血清基础培养，需添加一定比例的营养添加物 ，制备成完全培养基后使用。适合在MSC的复苏、传代和反应器扩种阶段使用。 间充质干细胞营养添加物，是一种人血小板裂解物（human Platelet Lysate, hPL），是非异源性、不含动物血清的，主要用做替代传统培养基中的动物血清的替代物。营养添加物含有丰富的生长因子和细胞因子，旨在提供细胞生长和增殖所需的营养成分。与传统的须添加动物血清的培养基相比，配合营养添加物使用的间充质干细胞无血清基础培养基能维持间充质干细胞的无分化生长，保持细胞的形态特征和正常的染色体核型等，保证间充质干细胞的高增殖率以及分化潜能，并能极大的降低批次间差异、降低各类病毒、支原体等污染风险。本套装包含间充质干细胞无血清基础培养基2L(500mL×4)以及间充质干细胞营养添加物 100mL。
完全培养基制备
1.使用前，请在37℃水浴中解冻间充质干细胞营养添加物。
2.在间充质干细胞无血清基础培养基中添加5%间充质干细胞营养添加物（即 500ml 基础培养基中加入25ml营养添加物），配制成完全培养基后使用。
3.配制好的完全培养基请立即使用，或保存于 2 - 8 ℃ 的条件下，并在 2 周内使用完毕。
细胞复苏
1.在37 ℃ 水浴中，迅速溶解一管冻存的细胞。融化后，迅速将细胞冻存管转移至生物安全柜中；
2.轻轻吸出冻存管中细胞，并转移至15 ml的无菌离心管中；
3.缓慢加入预热的间充质干细胞无血清完全培养基，同时轻晃离心管保证混匀；
4.室温下100-200g，离心3分钟，然后弃上清；
5.加入适量体积的完全培养基重悬细胞，计数，并调整细胞密度；
6.在培养器皿中加入适量预热的培养基，然后加入细胞重悬液 ，保证培养器皿内接种的活细胞密度约 5×103 个/cm2；
7.放入培养箱中培养，培养条件推荐：37 ℃ , 5 %CO2 ；
8.复苏后一天，弃去培养上清液，使用不含钙镁离子的 DPBS 冲洗单层细胞，然后吸除漂洗液；再加入适宜体积预热的完全培养基。
注：复苏时推荐使用50%冻存前原有的完全培养基 +50%本产品配制成的完全培养基，以减少细胞应激、保持细胞稳定性。
细胞传代
1.当细胞融合度达 70-80 % 时可进行传代；
2.使用前请在 37 ℃ 预热重组胰蛋白酶溶液和间充质干细胞无血清完全培养基；
3.吸除培养器皿中的培养基；使用不含钙镁离子的 DPBS 冲洗单层细胞，然后吸除漂洗液；
4.每个培养器皿中加入适宜的预热重组胰蛋白酶，确保液体覆盖到所有培养表面。在推荐的细胞培养条件下，培养 1-2 分钟；
5.使用倒置显微镜观察细胞培养瓶，确保细胞变圆皱缩；
6.然后在每个培养器皿中加入适宜的预热的完全培养基，确保其能完全覆盖培养表面；将细胞悬液转移至无菌离心管中（若想提高细胞密度，可再次使用适宜体积的不含钙镁离子的 DPBS漂洗培养瓶，然后收集液体入离心管）；
7.室温下100-200g，离心3分钟，然后弃上清；
8.加入适量体积的培养基重悬细胞，进行活细胞计数；
9.采用 5×103 个/cm2 的活细胞密度铺板，轻晃培养瓶以保证细胞分布均匀；
10.放入培养箱中培养，培养条件推荐：37 ℃ , 5 %CO2 ；
11.每 2-3 天根据细胞生长状态进行更换培养基或传代，新培养基加入前应37 ℃预热。