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案例应用丨同腾新创MSC培养基在间充质干细胞3D培养基中应用（下）
发布日期：2024-09-23
外泌体（exosome）是由细胞内多囊泡体（multivesicular body，MVB）与细胞膜融合后，以出芽形式释放到细胞外基质中的双层膜囊泡小体。其直径通常在 30-150 nm 之间，内部包裹有蛋白、脂类、mRNA 和 micro RNA 等多种成分[1-3]。外泌体的主要作用是信息传递，外泌体发挥功能作用可通过受体-配体作用内化、胞吞或与靶细胞的膜融合等方式将内容物传递至受体细胞胞内，从而引起相应的功能改变。
间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）来源多样、取材方便，易于分离、培养、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性，有望成为组织工程、细胞重编程，以及细胞转分化理想的起始材料，因此间充质干细胞的高效培养是很多实验研究的基础。
有文献报道，与在 2D 细胞培养中分泌的外泌体相比，当MSCs以球状形式培养时，外泌体的产生显著增加[4-5]。而此时球体的中心区域缺乏氧气和营养。也正是因为球体内部区域的细胞团积累引起的轻度缺氧[6-7]，从而增加了 MSCs 的存活率和这些细胞的分泌能力。
同腾新创自主开发了两款CEL-G® Culture MSC 培养基，CEL-G® Culture MSC Basal SFM间充质干细胞无血清基础培养基，适用于多种来源的间充质干细胞原代分离培养、以及传代扩增培养，支持MSC稳定传代至15代。CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM间充质干细胞外泌体生产无血清培养基，适用于间充质干细胞外泌体生产的细胞扩增阶段、以及收获阶段，支持MSCs 2D、3D细胞培养收获外泌体。上期，我们介绍了CEL-G® Culture MSC Basal SFM间充质干细胞无血清基础培养基。本周，我们重点介绍CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM间充质干细胞外泌体生产无血清培养基。
图1. CEL-G® Culture MSC 培养基系列
CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM间充质干细胞外泌体生产无血清培养基（货号：C04.004.002）是同腾新创专为人类间充质干细胞（MSC）,包括脐带间充质、骨髓间充质、脂肪间充质等干细胞设计的外泌体生产培养基。
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无血清，无动物源成分，批次间差异低；
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化学成分限定；
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含生长因子；
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不含酚红，含3.9g/L 葡萄糖，含 L-谷氨酰胺，含碳酸氢钠；
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本产品使用注射用水配制、为过滤除菌产品；
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储存条件：2-8℃，避光；
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本产品供科学研究或细胞体外培养使用，严禁用于人体。
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适用细胞系：脐带间充质、骨髓间充质、脂肪间充质等干细胞；
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细胞类型：贴壁细胞；
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在CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM中添加5%营养添加物（自购，或选用CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM Kit，货号：C04.004.004），配制成完全培养基，适合在MSC外泌体生产的细胞扩增阶段、收获阶段使用。
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CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM，不添加营养添加物，适合在MSC外泌体生产收获阶段使用。收获阶段不添加营养添加物，可排除添加物中颗粒物干扰。当细胞在完全培养基中生长3-4天后，换成无添加物的培养基培养收获上清。
注：在MSC外泌体生产收获阶段，可以根据工艺需求，自主选择培养基中是否添加营养添加物。在3D培养模式下（推荐配套使用CEL-G® Culture Ad60固定床生物反应器），外泌体生产的收获阶段，在细胞状态良好的前提下，可每 2-4天更换一次培养基，换液后可多次收获。
使用CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM间充质干细胞外泌体生产无血清培养基搭配同腾新创自研产品CEL-G® Culture Ad60 固定床生物反应器在3D条件下培养hUC-MSCs（人脐带间充质干细胞），经活细胞荧光染色显示hUC-MSCs能在固定床生物反应器中的膜材上进行贴附生长且分布较为均匀，同时细胞在膜上显示出 3D 球状。
图2. hUC-MSCs 使用 CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM 培养不同天数后取样条上细胞 密度观察
同时，在 hUC-MSCs接种上罐后，培养第三天起往后每 48 小时进行细胞上清液收获并更换新鲜完全培养基，共收获7批次细胞上清液。我们通过多批次收获细胞上清液，总计收获体积为 7500 mL，两个平行批次的外泌体累计总产量达(11.21±0.85)×1014 particles。
CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM间充质干细胞外泌体生产无血清培养基，适用于间充质干细胞外泌体生产的细胞扩增阶段、以及收获阶段；ExoPro培养基支持MSC 2D、3D细胞培养收获外泌体。使用CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM间充质干细胞外泌体生产无血清培养基培养的MSCs 生长速度快，搭配CEL-G® Culture Ad60 固定床生物反应器在3D培养条件下成球型生长。CEL-G® Culture MSC ExoPro SFM间充质干细胞外泌体生产无血清培养基相比国内同类培养基，外泌体产量可提高50%以上，并能极大的降低批次间差异、降低各类病毒、支原体等污染风险，为外泌体的高效生产提供了专业化一站式整体解决方案。
为庆祝产品上新，针对新发布的其中两款明星产品——即CEL-G®Cultur MSC ExoPro SFM间充质干细胞外泌体生产专用无血清培养基与CEL-G®Cultur MSC Basal SFM间充质干细胞无血清基础培养基，我们特此精心筹备了限量版免费试用装，诚邀干细胞外泌体生产领域的专家及行业伙伴率先体验。
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